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质粒提取
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质粒提取:质粒抽提方法即去除 RNA,将质粒与**基因组 DNA分开,去除蛋白质及其它杂质,以得到相对纯净的质粒。

质粒提取
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质粒提取

质粒提取

质粒提取时应该注意:1、摇菌时间:过液培养是一个普遍接受的概念,而且适合大部分情况。如果出现了问题,调整培养时间会有帮助:Nick 多,则增加培养时间;酶切出现问题,则减少培养时间。

2、起始菌体量:大家习惯说“从多少 ml 菌液中抽提质粒”,但要养成每次都观察菌体量的习惯,因为质粒毕竟是在菌体中,而且,抽提质粒所用的试剂量,都只与菌体量有关。

3、菌体的悬浮:如果没有悬浮菌体,则残留的菌体团块在溶液 II 加入后,变成一个外围裂解,往里不裂解,中间没有裂解的团块。这个团块在溶液 III 加入后,会有一部分蛋白质继续存在于溶液中,成为蛋白质残留的大根源。

4、使用相对过量的试剂:这是适合所有核酸抽提的建议。试剂相对过量的好处是:稳定性好,纯度高,操作更简单。如果认为这样不经济,就少用一点菌体。

5、裂解时间:加入溶液 II 后,混匀,体系好能立即变得清澈。体系如果变得清澈了,马上加入溶液 III 中和。如果体系不马上变清澈,下次少用一点菌液,或者多用一点溶液。如今的质粒设计得越来越复杂了,奇怪的现象也越来越多,而所有的奇怪现象,多与裂解时间有关。

6、中和的操作:在1.5ml离心管中加入溶液 III 后,先颠倒两次,使管底朝上,用指头弹击管底数次,再颠倒混匀。效果非常好。

7、中和后的离心去蛋白:要将蛋白质离心下去。如果发现离心后仍然有蛋白质漂浮在液面,继续离心的效果并不好;而将上清倒入另外一个离心管中,再离心,效果要好许多。

如果你想要了解更多的关于质粒提取的内容,欢迎您的来电,上海达为科生物将热情为您服务。

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